产品目录

本试剂盒用于从琼脂糖凝胶中或DNA反应体系中高效快速回收DNA片段，回收的DNA可直接用于酶切、连接、PCR、测序等多种分子生物学实验。

• 高效，回收效率最高可达90%（跟片段大小和胶浓度等因素有关）。
  
• 快速，整个过程只需要十余分钟。
  
• 洗柱液不需要额外加乙醇。
  
• 两用，既可用于琼脂糖胶回收，也可以用于PCR或其他酶反应回收。
  
• 范围广，回收DNA的长度范围为50bp～40 Kb（但效率各不相同）。
  
• 最大吸附量为10μg。

本试剂盒足够纯化50片含DNA的琼脂糖凝胶条（每片胶条重量不超过250mg），足够纯化50次酶反应（包括PCR反应，每次体积不超过250μL）。

• 用自备的干净刀片切取含DNA片段的琼脂糖凝胶（100mg左右，尽可能多地把多余的胶切除，否则会影响回收效率），放入一干净的1.5mL塑料离心管中称重，按重量比为1∶2的比例加入通用溶胶液(0.1g的琼脂糖凝胶需要加入0.2mL的通用溶胶液)。如果琼脂糖凝胶的浓度大于2%，则需要按1∶3的比例加入通用溶胶液。
  
  • 由于通用溶胶液是高盐溶液，因此在低温时容易产生沉淀。如果产生沉淀，需要60℃加热溶解后才可以使用。
    
  • 琼脂糖凝胶体积的大小与回收率成反比关系，即体积越大，越不利于回收，一次胶回收以使用100mg琼脂糖凝胶为宜。
• 50℃保温10分钟使胶完全溶化，每隔2～3分钟振荡数次以促进琼脂糖凝胶的溶化。
  
  • 如果在5～10分钟内凝胶溶化不完全，可以适当的延长水浴时间以使胶充分溶化，否则DNA包裹在琼脂糖凝胶中，影响DNA的回收效率。
    
  • 如果片段长度在300bp以下，建议不要50℃保温，而是延长溶胶时间，以免DNA变性，影响回收率。
• 在等待期间，活化离心吸附柱。在离心吸附柱中加入0.5mL吸附柱活化液，套上收集管后室温放置2分钟，然后12000rpm离心2分钟，倒弃穿透液，再将吸附柱套上收集管后待用。活化后的离心吸附柱必须在当天使用。
  
• 在上柱前，在溶化的胶中加入相当于胶块体积1/2的异丙醇（对100mg胶块，加50μL），快速振荡10秒混匀。
  
• 将溶液转移到离心吸附柱中，套上收集管，静置3分钟。
  
  • 静置有助于DNA与离心吸附柱的硅胶膜结合。本制品提供的离心吸附柱的最大上样体积为0.8mL，若溶胶液的总体积大于0.8mL，一次加不完，可以分多次将溶液加入到吸附柱中。
    
  • 可以延长静置时间使DNA与膜充分结合，提高回收效率。
• 12000～15000g室温离心1分钟，倒掉收集管中的穿透液。
  
• 加入0.7mL通用洗柱液于离心柱中，12000～15000g离心1分钟，倒弃收集管中的废液。如果回收的DNA用于盐敏感实验（如平末端连接或直接测序），建议加入通用洗柱液后静置2～5分钟再离心。
  
  • 通用洗柱液含有容易挥发物质，使用后一定要拧紧瓶盖，密闭保存。
• 12000～15000g离心半分钟以去除离心柱中的残留液体。
  
  • 洗脱DNA前的空甩很重要，其目的是去除膜上残留酒精，否则残留酒精会影响后续DNA反应。
• 将离心柱吸附置于一新的干净的塑料离心管中，加入50μL DNA洗脱液于离心吸附柱硅胶膜的中央。
  
  • 增大DNA洗脱液使用量有利于回收，但要注意实际上样量与最终回收体积的关系，以便于计算回收率。DNA洗脱液可以用TE或水替代，但回收率稍有降低。
    
  • 如果回收的DNA用于测序，则可用重蒸水洗脱DNA。DNA洗脱液可以也用TE替代，但用水或TE替代DNA洗脱液时，回收率可能稍有降低。
• 静置3分钟后12000～15000g离心1分钟。
  
• 离心管底部所得溶液即为纯化的DNA溶液，可立即用于后续实验或者放-20℃长期保存。如果将所得DNA溶液再次加回到离心吸附柱中，重复洗脱过程，将得到更多的DNA。
  
• 用电泳方法或测OD方法确定回收所得DNA的浓度。如果DNA浓度低，也可能低于测OD的分光光度计的检测极限之下，此种情况下就不能用此法。